PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT ADN TỔNG SỐ TỪ MẪU GỖ BẰNG KIT QIAGEN

PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT ADN TỔNG SỐ TỪ MẪU GỖ BẰNG KIT QIAGEN

Phương pháp nghiên cứu

Các mẫu được nghiền trong nitơ lỏng (-196oC) thành dạng bột mịn, sau đó sử dụng quy trình tách chiết DNA bằng các hóa chất của hãng Qiagen

1. Quy trình tách chiết ADN bằng các hoá chất của hãng Qiagen (kit tách chiết thực vật

DNeasy plant mini kit) 

Qiagen là hãng hóa chất có uy tín của Đức, nổi tiếng trên toàn thế giới. Kit tách ADN của hãng là kit tách có chất lượng tốt nhất, được nhiều phòng thí nghiệm trên toàn thế giới lựa chọn sử dụng. Kit tách ADN của Qiagen phù hợp để tách ADN từ các mô thực vật và nấm. Cột tách của Qiagen cho phép tách các phân tử ADN có kích thước lên đến 40Kb, phổ biến nhất là các phân tử ADN có kích thước từ 20 đến 25Kb 

- Với quy trình , tách bằng kit Qiagen, kết quả cho thấy mẫu lá Sưa tươi cho kết quả rất tốt, vạch sắc nét, rõ ràng, ít bị đứt gãy. Tuy nhiên với 3 mẫu gỗ còn lại thì hoàn toàn không quan sát thấy có vạch sáng (hình 1).

Hình 1. Kết quả điện di trên gel agarose ADN tổng số tách b ng kit Qiagen

Kết quả đo OD ở bước sóng 260nm

Kết quả đo OD 260nm/pha lõang 100 lần	Kit Qiagen
Mẫu lá Sưa tươi	2,8640
Mẫu gỗ Sưa	0,1201
Mẫu gỗ Trắc	0,0132
Mẫu gỗ Giáng hương	0,0091

Từ kết quả do OD ở bước sóng 260nm, nồng độ thực của ADN có trong 100µl mẫu được tính theo công thức sau:

C [ADN] (ng/ml) = OD 260nm ´ 50ng/ml ´ 100 lần pha loãng/10 lần (100µl × 10 = 1ml)

Từ đó, ta có kết quả nồng độ ADN có trong 100µl mẫu tách theo từng phương pháp được thể hiện ở bảng 2.

Nồng độ ADN (ng) thu được trong 100µl mẫu	Kit Qiagen
Mẫu lá Sưa tươi	996
Mẫu gỗ Sưa	9,5
Mẫu gỗ Trắc	8,6
Mẫu gỗ Giáng hương	4,55

Kết quả đo OD ở bước sóng 280nm

Kết quả đo OD 280nm/pha lo ng 100 lần	Kit Qiagen
Mẫu lá Sưa tươi	1,102
Mẫu gỗ Sưa	0,0098
Mẫu gỗ Trắc	0,00892
Mẫu gỗ Giáng hương	0,0046

Tỷ lệ OD 260/280 của các m  u ADN tách theo 3 phương pháp khác nhau

Tỷ lệ OD 260nm/280nm	Kit Qiagen
Mẫu lá Sưa tươi	1,807
Mẫu gỗ Sưa	1,938
Mẫu gỗ Trắc	1,9282
Mẫu gỗ Giáng hương	1,9782